超高速離心機分離方法
一(yī / yì /yí):差速離心:
逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液中的(de)一(yī / yì /yí)些組份。 差速離心是(shì)一(yī / yì /yí)種最常用的(de)方法。在(zài)這(zhè)種方法中,離心管在(zài)開始時(shí)裝滿了(le/liǎo)均一(yī / yì /yí)的(de)樣品溶液。
通過在(zài)一(yī / yì /yí)定速度下一(yī / yì /yí)定時(shí)間的(de)離心後,就(jiù)可得到(dào)兩個(gè)部份:沉澱和(hé / huò)上(shàng)清液。 通常在(zài)第一(yī / yì /yí)次離心時(shí)把大(dà)部分不(bù)需要(yào / yāo)的(de)大(dà)粒子(zǐ)沉降去掉。這(zhè)時(shí)所需的(de)組份大(dà)部分仍留在(zài)上(shàng)清液中,然後将收集到(dào)的(de)上(shàng)清液以(yǐ)更高速度離心,把所需的(de)粒子(zǐ)沉積下來(lái)。離心的(de)時(shí)間要(yào / yāo)選擇得當,使大(dà)部份不(bù)需要(yào / yāo)的(de)更小的(de)粒子(zǐ)仍留在(zài)上(shàng)清液中。
對于(yú)得到(dào)的(de)沉澱和(hé / huò)上(shàng)清液可以(yǐ)進行進一(yī / yì /yí)步的(de)離心,直到(dào)達到(dào)所需要(yào / yāo)的(de)分離純度爲(wéi / wèi)止。 差速離心的(de)特點是(shì)操作簡單,但分離純度不(bù)高。
二:密度梯度離心法:
可以(yǐ)同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離,具有很好的(de)分辨率。
(1)速率區帶法: 根據樣品中不(bù)同粒子(zǐ)所具有的(de)不(bù)同的(de)尺寸大(dà)小及沉降速度(S)。大(dà)緻步驟如下: 在(zài)離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的(de)密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。 将所需分離的(de)樣品小心地(dì / de)加至密度梯度溶液的(de)頂部。樣品在(zài)梯度溶液表面形成一(yī / yì /yí)負梯度。 由于(yú)不(bù)同大(dà)小的(de)粒子(zǐ)在(zài)離心力作用下,在(zài)梯度中移動的(de)速度不(bù)一(yī / yì /yí)樣,所以(yǐ)經過離心後會形成幾條分開的(de)樣品區帶。 注意:樣品粒子(zǐ)的(de)密度必須大(dà)于(yú)梯度液注中任一(yī / yì /yí)點的(de)密度。離心過程必須在(zài)區帶到(dào)達管子(zǐ)底部前停止。
(2)等密度離心法: 根據粒子(zǐ)的(de)不(bù)同密度來(lái)分離。離心過程中,粒子(zǐ)會移至與它本身密度相同的(de)地(dì / de)方形成區帶。 密度樣度的(de)選擇要(yào / yāo)使梯度的(de)範圍包括所有待分離粒子(zǐ)的(de)密度。樣品可以(yǐ)在(zài)密度梯度液粒上(shàng)面或均勻分布在(zài)密度梯度中,經離心後,樣品粒子(zǐ)達到(dào)它們的(de)平衡點。
注意:平衡後粒子(zǐ)的(de)分離完全由其密度決定,與時(shí)間無關,此時(shí)再改變離心轉速,隻能改變區帶的(de)相對位置。