離心機在(zài)預冷狀态時(shí),離心機蓋必須關閉,離心結束後取出(chū)轉頭要(yào / yāo)倒置于(yú)實驗台上(shàng),擦幹腔内餘水,離心機蓋處于(yú)打開狀态。
1. 轉頭在(zài)預冷時(shí)轉頭蓋可擺放在(zài)離心機的(de)平台上(shàng),或擺放在(zài)實驗台上(shàng),千萬不(bù)可不(bù)擰緊浮放在(zài)轉頭上(shàng),因爲(wéi / wèi)一(yī / yì /yí)旦誤啓動,轉頭蓋就(jiù)會飛出(chū),造成事故!
2. 轉頭蓋在(zài)擰緊後一(yī / yì /yí)定要(yào / yāo)用手指觸摸轉頭與轉蓋之(zhī)間有無縫隙,如有縫隙要(yào / yāo)擰開重新擰緊,直至确認無縫隙方可啓動離心機。
3. 在(zài)離心過程中,操作人(rén)員不(bù)得離開離心機室,一(yī / yì /yí)旦發生異常情況操作人(rén)員不(bù)能關電源POWER),要(yào / yāo)按STOP。在(zài)預冷前要(yào / yāo)填寫好離心機使用記錄。
4. 不(bù)得使用僞劣的(de)離心管,不(bù)得使用老化、變形、有裂紋的(de)離心管。
5. 在(zài)節假日和(hé / huò)晚間最後一(yī / yì /yí)個(gè)使用離心機例行安全檢查後方能離去。
6. 在(zài)儀器使用過程中發生機器故障,部件損壞情況時(shí)要(yào / yāo)及時(shí)與技術人(rén)員聯系。
運行注意事項
爲(wéi / wèi)了(le/liǎo)确保安全和(hé / huò)離心效果,儀器必須放置在(zài)堅固水平的(de)台面上(shàng),工程塑料蓋門上(shàng)不(bù)得放置任何物品;樣品必須對稱放置,并在(zài)開機前确保已擰緊螺母。
使用前應檢查轉子(zǐ)是(shì)否有傷痕、腐蝕等現象,同時(shí)應對離心杯做裂紋、老化等方面的(de)檢查,發現有疑問立即停止使用,并與廠方聯系;開機運轉前請務必擰緊轉頭的(de)壓緊螺帽,以(yǐ)免高速旋轉的(de)轉頭飛出(chū)造成事故。 轉速設定不(bù)得超過最高轉速,以(yǐ)确保機器安全運轉。
使用中如果出(chū)現 0.00或其他(tā)數字,機器不(bù)運轉,應關機斷電,10秒後重新開機,待所設轉速顯示後,再按運轉鍵,機器将照常運轉。
如需分離樣品的(de)比重超過 1.2克/立方厘米,最高轉速N必須按下式修正:N=N MAX *(1.2/樣品比重) 1/2 ,N MAX =轉子(zǐ)極限轉速。 不(bù)得在(zài)機器運轉過程中或轉子(zǐ)未停穩的(de)情況下打開蓋門,以(yǐ)免發生事故。 離心杯必須等量灌注樣品,切不(bù)要(yào / yāo)使轉頭在(zài)不(bù)平衡的(de)狀況下運行。 離心機一(yī / yì /yí)次運行最好不(bù)要(yào / yāo)超過 60分鍾。 離心機必須可靠接地(dì / de);機器不(bù)使用,請拔掉電源插頭。
使用注意事項
※1、離心機在(zài)運轉時(shí),不(bù)得移動離心機。
※2、安放離心機的(de)地(dì / de)面應堅實平整,二隻調平螺杆調節使離心機與地(dì / de)面接觸和(hé / huò)均勻受力,以(yǐ)免産生振動。
※3、離心管加液應稱量平衡,若加液差異過大(dà)運轉時(shí)會産生大(dà)的(de)振動,此時(shí)應停機檢查,使加液符合要(yào / yāo)求,離心 試管必須成偶數對稱放入。
※4、若運行時(shí)有離心試管破裂,會引起較大(dà)振動應立即停機處理。
※5、每次停機後再開機的(de)時(shí)間間隔不(bù)得少于(yú)5分鍾,以(yǐ)免壓縮機堵轉而(ér)損壞。
※6、每次離心完成後,必須将轉子(zǐ)取出(chū),否則長時(shí)間放在(zài)軸上(shàng),可能鏽死,轉子(zǐ)會取不(bù)出(chū)而(ér)造成離心機整機報廢。
※7、電源必須有接地(dì / de)線。
※8、本機轉子(zǐ)使用壽命爲(wéi / wèi)三年,過期應更換轉子(zǐ)。
※9、所有轉子(zǐ)不(bù)能超過其最高轉速使用。
離心機 是(shì)借離心力分離液相非均一(yī / yì /yí)體系的(de)設備。根據物質的(de)沉降系數、質量、密度等的(de)不(bù)同,應用強大(dà)的(de)離心力使物質分離、濃縮和(hé / huò)提純的(de)方法稱爲(wéi / wèi)離心。一(yī / yì /yí)般說(shuō), 離心機轉速在(zài) 20 000r/min 以(yǐ)上(shàng)的(de)稱爲(wéi / wèi)超速離心。
離心技術,特别是(shì)超速離心技術是(shì)分子(zǐ)生物學、生物化學研究和(hé / huò)工業生産中不(bù)可缺少的(de)手段。 1924 年 T.Svedberg 和(hé / huò) Rinde 研制出(chū)世界上(shàng)第一(yī / yì /yí)台渦輪超速離心機以(yǐ)來(lái),發展非常迅速,現在(zài)已廣泛地(dì / de)應用到(dào)科學研究和(hé / huò)生産的(de)各個(gè)領域。現在(zài)離心機轉頭最高轉速已達 100000 r/min ,最大(dà)離心力達 700 000 g 。
離心機 作爲(wéi / wèi)一(yī / yì /yí)種手段,具有許多優點。例如,超速離心可在(zài)低溫下操作,保護了(le/liǎo)生物大(dà)分子(zǐ)的(de)活性。制備型的(de)離心機負載量大(dà),一(yī / yì /yí)次可分離提純幾克樣品,比層析、電泳上(shàng)的(de)樣品量大(dà)得多。
分析離心機不(bù)僅可測物質的(de)分子(zǐ)量,還可檢驗物質的(de)純度、構象、沉降系數等。因此離心技術在(zài)生物學研究中占有重要(yào / yāo)的(de)地(dì / de)位,是(shì)分離、純化細胞、病毒、蛋白、核酸和(hé / huò)酶的(de)最方便最有效的(de)工具。
( 一(yī / yì /yí) ) 離心原理 當含有細小顆粒的(de)懸浮液靜置不(bù)動時(shí),由于(yú)重力場的(de)作用使得懸浮的(de)顆粒逐漸下沉。粒子(zǐ)越重,下沉越快,反之(zhī)密度比液體小的(de)粒子(zǐ)就(jiù)會上(shàng)浮。微粒在(zài)重力場下移動的(de)速度與微粒的(de)大(dà)小、形态和(hé / huò)密度有關,并且又與重力場的(de)強度及液體的(de)粘度有關。象紅血球大(dà)小的(de)顆粒,直徑爲(wéi / wèi)數微米,就(jiù)可以(yǐ)在(zài)通常重力作用下觀察到(dào)它們的(de) 沉降過程。 此外,物質在(zài)介質中沉降時(shí)還伴随有擴散現象。擴散是(shì)無條件的(de)絕對的(de)。擴散與物質的(de)質量成反比,顆粒越小擴散越嚴重。而(ér)沉降是(shì)相對的(de),有條件的(de),要(yào / yāo)受到(dào)外力才能運動。沉降與物體重量成正比,顆粒越大(dà)沉降越快。對小于(yú)幾微米的(de)微粒如病毒或蛋白質等,它們在(zài)溶液中成膠體或半膠體狀态,僅僅利用重力是(shì)不(bù)可能觀察到(dào)沉降過程的(de)。因爲(wéi / wèi)顆粒越小沉降越慢,而(ér)擴散現象則越嚴重。所以(yǐ)需要(yào / yāo)利用離心機産生強大(dà)的(de)離心力,才能迫使這(zhè)些微粒克服擴散産生沉降運動。 離心就(jiù)是(shì)利用離心機轉子(zǐ)高速旋轉産生的(de)強大(dà)的(de)離心力,加快液體中顆粒的(de)沉降速度,把樣品中不(bù)同沉降系數和(hé / huò)浮力密度的(de)物質分離開。離心力 (F) 的(de)大(dà)小取決于(yú)離心轉頭的(de)角速度 ( ω , r/min) 和(hé / huò)物質顆粒距離心軸的(de)距離 (r , cm) 。它們的(de)關系是(shì): F = ω 2R 爲(wéi / wèi)方便起見, F 常用相對離心力也(yě)就(jiù)是(shì)地(dì / de)心引力的(de)倍數表示。即把 F 值除以(yǐ)重力加速度 g ( 約等于(yú)9.8m/s2.) 得到(dào)離心力是(shì)重力的(de)多少倍,稱作多少個(gè) g 。例如離心機轉頭平均半徑是(shì) 6cm ,當轉速是(shì) 60 000 r/min 時(shí),離心力是(shì) 240 000 × g ,表示此時(shí)作用在(zài)被離心物質上(shàng)的(de)離心力是(shì)日常地(dì / de)心引力的(de) 24 萬倍。因此,轉速 r/min 和(hé / huò)離心力 g 值之(zhī)間并不(bù)是(shì)成正比關系,還和(hé / huò)半徑有關。同樣的(de)轉速,半徑大(dà)一(yī / yì /yí)倍,離心力 (g 值 ) 也(yě)大(dà)一(yī / yì /yí)倍。轉速 (r/min) 和(hé / huò)離心力 (g 值 ) 之(zhī)間的(de)關系可用下式換算: 式中: r 爲(wéi / wèi)半徑 (cm) , g 爲(wéi / wèi)離心力 (g 值 )
(二 ) 超速離心機的(de)離心方法 用離心方法分離生物大(dà)分子(zǐ)和(hé / huò)亞細胞物質的(de)基本原理是(shì)根據它們在(zài)液體介質中或者沉降速度不(bù)同而(ér)形成不(bù)同的(de)區帶,或者它們的(de)密度不(bù)同而(ér)停留在(zài)液體介質中不(bù)同的(de)位置而(ér)把它們一(yī / yì /yí)一(yī / yì /yí)分開。前者是(shì)沉降速度法,應用該法時(shí)液體介質的(de)最大(dà)密度要(yào / yāo)小于(yú)樣品中最小顆粒的(de)密度,離心時(shí)選用高轉速和(hé / huò)短時(shí)間;後者是(shì)沉降平衡法,應用該法時(shí)液體介質的(de)最大(dà)密度要(yào / yāo)大(dà)于(yú)樣品中最小顆粒的(de)密度,離心時(shí)選用較低轉速和(hé / huò)較長時(shí)間。
實際操作有幾種形式:
1. 差速離心這(zhè)種方法是(shì)選擇不(bù)同轉速的(de)離心,分别分離各個(gè)不(bù)同組分。例如先用低速沉降大(dà)顆粒和(hé / huò)上(shàng)清液,在(zài)高速離心上(shàng)清沉降中等顆粒,最後超速離心上(shàng)清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上(shàng)情液的(de)方法,把不(bù)同大(dà)小的(de)顆粒分開。 這(zhè)種方法比較簡單,方便。分離的(de)組份沉到(dào)管底,因此可以(yǐ)迅速濃縮所要(yào / yāo)的(de)組份,減少體積。但回收率和(hé / huò)純度是(shì)有矛盾的(de),要(yào / yāo)提高回收率,勢必提高轉速或延長離心時(shí)間,這(zhè)樣大(dà)小相近的(de)顆粒也(yě)會沉到(dào)管底。因此該法多用于(yú)粗提純或初步濃縮樣品。
2. 速度區帶 ( 或速度梯度 ) 離心 本法是(shì)将樣品放在(zài)一(yī / yì /yí)個(gè)連續的(de)密度梯度液體上(shàng),通過離心,大(dà)顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經過一(yī / yì /yí)段時(shí)間,相同的(de)顆粒就(jiù)在(zài)同一(yī / yì /yí)深度形成一(yī / yì /yí)條帶子(zǐ),因此把各種組份分開來(lái)。它适用于(yú)分離密度相同、而(ér)大(dà)小不(bù)同的(de)物質,如不(bù)同的(de)蛋白質組份密度都差不(bù)多,但分子(zǐ)量不(bù)一(yī / yì /yí)樣,用本法很容易将其分 開。但對密度不(bù)同、大(dà)小類似的(de)物質則不(bù)易分離。蔗糖梯度是(shì)一(yī / yì /yí)種常用的(de)介質。用不(bù)同濃度的(de)蔗糖溶液 (5%-60%) 配成梯度,用于(yú)梯度離心。再分别進行收集處于(yú)不(bù)同區帶裏的(de)各個(gè)組份。
(三)保養注意事項
1.清潔離心機腔體和(hé / huò)轉頭,并擦幹腔内冷凝水。
2.使用完後要(yào / yāo)打開門,直至腔内恢複常溫。
3.離心之(zhī)前要(yào / yāo)平衡樣品。
4.離心之(zhī)後要(yào / yāo)注意消毒和(hé / huò)滅菌。
5.根據需要(yào / yāo)選用tubes/bottles、adapters以(yǐ)及spacers,根據要(yào / yāo)求加樣品量。
6.必要(yào / yāo)時(shí)預冷轉子(zǐ)。
7.轉頭的(de)維護和(hé / huò)存放,注意保護底部的(de)計數環。
8.工具的(de)準确使用和(hé / huò)轉頭的(de)正确安裝。